一個抗體分子上的兩個抗原結(jié)合部位是相同的，位于兩臂末端稱抗原結(jié)合片段（antigen-binding fragment, Fab）。'Y'的柄部稱結(jié)晶片段（crystalline fragment,Fc），糖結(jié)合在FC 上。Fab是抗原結(jié)合片段，直接結(jié)合抗原。直接效應。Fc是結(jié)晶片段，間接效應端。

抗體與細胞的結(jié)合過程中一般會出現(xiàn)以下情況：

• 在抗體孵育過程中，只有抗體的Fab端與目標抗原結(jié)合（特異性結(jié)合）時，這樣的流式圖才能反應出細胞抗原表達的真實情況。

• 但是，在分子間各種作用力的推動下，抗體FC端也經(jīng)常與細胞表面的FC受體結(jié)合，即我們常說的非特異性結(jié)合，此時流式結(jié)果就往往不能反映真正的抗原表達情況。

那么，我們在實驗中如何避免這種非特異性情況的出現(xiàn)呢？

• FC受體封閉：

  加入FC受體封閉劑，對細胞膜表面的FC受體提前進行人工封閉干預；或做CD16/CD32抗體封閉實驗；

• 同型對照（Isotype）抗體；

• 重組基因工程改造抗體（REAfinity? Recombinant Antibodies）。

如上圖所示，REAfinity?重組基因工程改造抗體的制備過程與傳統(tǒng)雜交瘤抗體不同，因此也具備獨特的優(yōu)勢：高純度、批次穩(wěn)定性、高重復性：

• REAfinity?抗體是挑選市場上最佳克隆號的抗體，克隆出特異性的Fab片段，因此，特異性和親和力都非常高

• 將該Fab序列與人IgG1 Fc段序列重組，同時，對Fc段序列進行點突變，使其不會對Fc γ受體產(chǎn)生非特異性結(jié)合，因此也無需使用FC受體阻斷劑。同時，只需要根據(jù)熒光素選擇相應的通用型同型對照抗體，無需根據(jù)FC端亞型選擇各種Isotype，一舉多得

  

如圖，使用REAfinity抗體時，無需使用FcR阻斷劑，幾乎無非特異染色。

使用REAfinity類抗體時，僅需選用通用型同型對照抗體。

• 最后，將重組后的抗體序列轉(zhuǎn)入HEK 293細胞表達并純化獲得重組抗體，純度更高、批次穩(wěn)定性更好
  

REAfinity抗體無輕鏈干擾，抗體純度更高。

REAfinity重組基因工程改造抗體，讓您的流式分析/分選實驗更加精確，更加穩(wěn)定！